口腔 / 咽拭子基因組 DNA 快速提取試劑盒

商品屬性：

商品介紹：

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。

產品介紹：

本試劑盒采用特制的進口 DNA 吸附柱和緩沖液系統，特別適合于從口腔咽拭子中分離純化基因組 DNA。各種來源樣品裂解消化處理后 DNA 在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜（特別配備了 Carrier RNA 可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組 DNA 從硅基質膜上洗脫。純化后的 DNA無雜質和 PCR 抑制劑，可直接適用于 PCR 分析。

產品特點：

1.配備了 Carrier RNA 用于充分收集特別微量 DNA。

2.提取的 DNA 純度高，質量穩定可靠，可適用于各種常規操作，包括 PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

注意事項：

1.結合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.避免試劑長時間暴露于空氣中發生揮發、氧化、pH 值變化。

3.Carrier RNA

a.Carrier RNA 使用方法：如果起始處理量很少（口腔咽拭子上收集到的細胞很少），我們推薦使用 Carrier RNA，如果預期有較大量 DNA 產量，用戶可以根據需要選擇是否加入 Carrier RNA。使用時每個樣品提取所需結合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 儲存溶液，將結合液 CB 與 Carrier RNA溶液充分顛倒混勻即可(結合液 CB 容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據樣品數量，在總共需要的結合液 CB 中加入總共需要的 Carrier RNA 混勻備用。混合液在室溫 24 小時內穩定。

b.Carrier RNA 加入過多造成 DNA 洗脫液中 Carrier RNA 濃度過高，下游 PCR 反應可能受干擾，加入過少可能并不能幫助提高 DNA 產量和 PCR 敏感度，因此加入量應該在具體試驗中調整以得到最佳效果。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：第一次使用前請先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

取樣：取一根醫用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位），伸進口腔，緊靠臉頰內側來回刮拭 20 次（不時旋轉棉棒），需充分接觸口腔粘膜。

注意：避免用手觸及棉簽，采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染，取樣前 30 min 內應該避免進食或者飲水。

1.用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，放入 2ml 離心管中，加入 400μl 裂解液 ML。

2.再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻，56℃放置 30 min，期間每 10 min 渦旋混勻 10 sec。

3.加入 400μl 結合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置 10 min（擠壓去除拭子，

將盡可能多的裂解液轉移至新的離心管中）。如果拭子上細胞數量少，導致提取的基因組 DNA 產量過低, 可以在 400μl 結合液 CB中加入 1μl Carrier RNA 儲存溶液。

4. 冷卻后加 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內壁的液滴，收集所有的液體到管底。（如果周圍環境高于 25℃,乙醇需要冰上預冷后再加入）

5.將上一步混合物中加入一個吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液。

6.加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 離心 30 sec，棄廢液。

7.加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。

8.重復操作步驟 7。

9.將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數分鐘，以晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

10.取出吸附柱 AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 20-50μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱效果更好），室溫放置 1 min，12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置 1 min，12,000rpm 離 心 1 min 。 洗 脫 體 積 越 大 ， 洗 脫 效 率 越 高 ， 如 果 需要 DNA 濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但是最小體積不應少于 20μl，體積過小降低 DNA 洗脫效率，減少 DNA 產量。

（注意:DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解）DNA 濃度及純度檢測得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用滅菌水比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

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