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二氧化碳培養(yǎng)箱的滅菌消毒和日常維護(hù)方法

來(lái)源:上海潤(rùn)度生物科技有限公司   2020年02月19日 10:48  

1. 二氧化碳培養(yǎng)箱的滅菌消毒方式
二氧化碳培養(yǎng)箱中的微生物往往會(huì)對(duì)培養(yǎng)的結(jié)果產(chǎn)生一定的影響,常見(jiàn)的微生物處理方式包括物理過(guò)濾和滅菌,下面讓我們一起來(lái)探討兩種方式。

1.1 物理過(guò)濾  
將箱體內(nèi)氣體通過(guò)過(guò)濾器循環(huán),使箱體內(nèi)氣體潔凈度達(dá)到一定的級(jí)別(常見(jiàn)UPLA過(guò)濾器為1級(jí)、HEPA 過(guò)濾器為 100 級(jí));主要作用是保持箱體內(nèi)潔凈度,保證培養(yǎng)箱體內(nèi)的環(huán)境,但對(duì)微生物及病毒不起到任何的殺滅作用,僅僅是將箱體內(nèi)的微生物過(guò)濾到過(guò)濾器內(nèi),這樣需要對(duì)過(guò)濾器進(jìn)行定期更換,采用物理過(guò)濾的培養(yǎng)箱更適合于環(huán)境條件較好的實(shí)驗(yàn)室。
1.2 滅菌  
殺滅或清除傳播媒介上的所有微生物(包括芽胞),使之達(dá)到無(wú)菌程度。經(jīng)過(guò)滅菌的物品稱“無(wú)菌物品”,培養(yǎng)箱內(nèi)的無(wú)菌處理是指殺滅所謂微生物、病毒等,*避免環(huán)境對(duì)樣本的影響,以及消除不同樣本之間的交叉污染。根據(jù)不同的去除對(duì)象以及應(yīng)用環(huán)境需求,采用有效的方法。

1.2.1 微生物分類
根據(jù)微生物的抵抗能力不同,可將微生物分為如下幾類:
① 細(xì)菌繁殖體:易被一般的消毒劑殺滅,一般革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌對(duì)消毒劑較敏感,采用化學(xué)消毒效果較為明顯;革藍(lán)氏陰性桿菌則常有較強(qiáng)的抵抗力,一般的化學(xué)消毒效果不明顯,但對(duì)熱敏感,采用熱力學(xué)方法效果明顯。
② 細(xì)菌芽孢和真菌芽孢:有厚厚的孢子壁,對(duì)化學(xué)消毒劑有較強(qiáng)的抵抗力,一般的化學(xué)消毒對(duì)芽孢效力有限;消毒能力強(qiáng)的化學(xué)試劑對(duì)芽孢有一定的殺滅作用,但對(duì)濃度、處理方法等要求嚴(yán)格;常見(jiàn)的方法是采用熱力學(xué)方法。
③ 病毒:種類較多,不同病毒種類對(duì)外界的抵抗能力不同,化學(xué)試劑消毒的效果也不相同,RNA活性受溫度影響明顯,一般采用熱力學(xué)方法去除。
④ 真菌:普遍對(duì)環(huán)境抵抗能力強(qiáng),一般的紫外消毒方式和化學(xué)試劑消毒達(dá)不到預(yù)期的效果,通常采用熱力學(xué)方法處理,煮沸或使用高壓滅菌燈。
1.2.2 熱力學(xué)滅菌方法
培養(yǎng)箱內(nèi)常見(jiàn)的熱力學(xué)滅菌方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌。
①干熱滅菌:將箱體內(nèi)加熱到120℃以上,濕度為20% 以內(nèi),持續(xù)一定的時(shí)間,通過(guò)高溫使蛋白質(zhì)及核酸變性失活,達(dá)到殺滅的目的。有些真菌芽孢,由于厚厚的細(xì)胞壁保護(hù),能夠抵抗一定的高溫,滅菌不能*。
②濕熱滅菌:在高溫的同時(shí)保持箱體內(nèi)飽和濕度,達(dá)到*滅菌效果。
濕熱滅菌相比于干熱滅菌,主要優(yōu)點(diǎn)是:
①濕熱滅菌中的菌體吸收水分,蛋白質(zhì)含水量增高,所需凝固溫度降低,易凝固變性;
②高溫水蒸汽對(duì)蛋白質(zhì)有良好的穿透力,從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡;

③蒸汽有潛熱存在,能迅速提高菌體的溫度,從而增加滅菌效力。
由此可見(jiàn),培養(yǎng)箱采用濕熱滅菌是一種可行且效果良好的滅菌方法,能*消滅細(xì)菌、真菌、孢子、病毒等微生物且沒(méi)有二次污染。良好一個(gè)季度采用一次高溫滅菌,消除潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。

2. 二氧化碳培養(yǎng)箱的清潔維護(hù)     
居安思危,防患于未然,是智者避免災(zāi)禍的良方,是降低損失的良好措施。二氧化碳培養(yǎng)箱的日常維護(hù)就是良方,做好以下幾個(gè)方面可以大大降低污染的概率:

2.1  重視管理  安全為目的,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的重要性。定期對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正,至少每年一次。各項(xiàng)數(shù)值一旦固定后,不要隨意調(diào)節(jié),以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動(dòng),降低機(jī)器的靈敏度,同時(shí)還會(huì)影響培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)。
2.2  規(guī)范操作  必須穿著實(shí)驗(yàn)服,換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)必須配帶一次性手套,特別是打開(kāi)培養(yǎng)箱前,必須先用75%的酒精噴洗雙手,再取出培養(yǎng)箱中的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后,再放回培養(yǎng)箱時(shí),同樣也要先噴酒精消毒。培養(yǎng)箱的兩個(gè)門開(kāi)關(guān)取(放)物要迅速,否則會(huì)影響CO2的濃度、溫度和濕度,造成污染。切記開(kāi)門時(shí)不要對(duì)著培養(yǎng)箱說(shuō)活,大口呼吸甚至是打噴嚏。
2.3  清潔  去除灰塵、污垢和有機(jī)污漬。粉塵、污物以及有機(jī)物是微生物的棲身之所,并可能影響除污染劑(抗菌劑、化學(xué)殺菌劑以及消毒劑)的作用,必須先經(jīng)過(guò)清潔才能實(shí)現(xiàn)消毒和滅菌的目的。
2.4  消毒抑菌  醫(yī)用酒精可以很好地起到消毒作用,日??墒褂?5%的酒精對(duì)培養(yǎng)箱主體和內(nèi)部進(jìn)行擦拭,一個(gè)月一次即可。培養(yǎng)箱內(nèi)部可以放置2%~10%的硫酸銅溶液,硫酸銅溶液具有一定的殺菌抑菌效果。

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