【儀表網 行業標準】根據國家標準化管理委員會、民政部印發的《團體標準管理規定》及《中國計量測試學會團體標準管理辦法》有關規定，經中國計量測試學會批準立項，由青島星賽生物科技有限公司等單位牽頭起草的《益生菌活菌計數及代謝活力檢測拉曼光譜法》團體標準現已完成征求意見稿的編制，為保證標準的科學性、嚴謹性和適用性，現面向社會廣泛公開征求意見。意見反饋郵箱：zhoupin@singlecellbiotech.com。
 

　　2001 年聯合國糧食及農業組織和世界衛生組織(FAO/WHO)提出，當攝入足夠數量時，對宿主產生健康益處的活性微生物稱之為益生菌。國際益生菌和益生元科學協會(ISAPP)2021 年對發酵食品定義為：通過所需的微生物生長和食品成分的酶轉化而制成的食品。其中特別指出，當發酵食品中含有確切的活益生菌時，才能標注“含有益生菌”，并認為改善食品營養、調節人體免疫和腸道菌群、含有影響腸道和機體功能的生物活性物質等，是其促進健康的潛在機制。近年來，隨著益生菌概念的流行，益生菌的產品線已經從飲食補充劑擴展到臨床治療。對于益生菌，不同菌株的活細胞數是否符合標準是公眾主要關心的問題。但是，由于國內益生菌行業長期缺乏產品標準規范，導致益生菌產品質量良莠不齊，許多商品的說明書上并未標注關于所含益生菌菌株的功效和產品中實際存在的活細胞數量(菌落形成單位[CFU/毫升])。因此，為規范愈發龐大的益生菌市場，避免益生菌產品市場規模不斷擴大而出現的虛假夸大宣傳等亂象，對商業益生菌產品進行包括快速活菌計數、原位活力測試在內的定性和定量評價的檢測方法迫在眉睫。
 

　　然而，目前行業中廣泛應用的方法有很大的局限性。對于益生菌產品的活菌計數、活性檢測等質檢工作存在檢測周期長、成本昂貴、混合益生菌產品檢測效果差等問題。為提高益生菌產品的質量檢測能力，本標準提出了拉曼光譜檢測方法，對益生菌產品的活細胞數和原位活力進行測定。該方法能夠準確測定益生菌產品中的活菌數和活性指標。該方法的建立為今后豐富我國益生菌產品的質控工作打下了一個良好的基礎，并為制定中國自己的益生菌標簽法律法規以及檢測方法提供可靠的數據保障。
 

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本標準分為6個部分：范圍、規范性引用文件、術語和定義、試劑或材料、儀器設備、檢驗要求和方法。
 

　　本文件規定了益生菌產品活菌計數及代謝活力的術語和定義、描述了益生菌活菌計數方法和代謝活力的拉曼光譜檢測方法。
 

　　本文件適用于含益生菌產品的活菌計數及代謝活力檢測。包括添加的植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、副干酪乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、格氏乳桿菌、卷曲乳桿菌、乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌等一種或多種菌種。
 

　　檢測原理：
 

　　利用重水(D2O)同位素標記時，具有代謝活力的細胞會同化氘(D)并代替氫(H)進行合成代謝，使得細菌的脂類、蛋白質、DNA 等生物質被氘化，所產生新的 C-D 鍵可被拉曼光譜靈敏檢測到，并且碳-氘(C-D)峰強度可反映細胞的代謝活力。基于細胞的代謝活力來進行活菌計數，即具有代謝活力的細胞為活細胞。CDR 為 C-D 鍵的峰值光譜強度除以 C-D 鍵和 C-H 鍵的峰值光譜強度之和，以量化 C-H鍵中 D 的替代程度，即碳-氘峰值占比；所述 C-D 鍵的光譜強度是指在拉曼位移波數范圍(2040-2300)cm−1范圍內的拉曼光譜強度；C-H 鍵的光譜強度是指在拉曼位移波數范圍(2800-3100)cm−1范圍內的拉曼光譜強度。
 

　　儀器設備：
 

　　1.顯微拉曼光譜儀：光譜分辨率不低于5cm-1，拉曼位移波數范圍至少包含400cm-1-3200 cm-1。需配備50倍物鏡、100倍物鏡。
 

　　2.恒溫培養箱：溫控范圍包含36 ℃，波動<±1 ℃；
 

　　3.振蕩重懸器：轉速覆蓋1000-2800r/min；
 

　　4.分析天平：感量0.1mg和0.01g；
 

　　5.離心機：最大轉速不低于5000r/min，有2-8℃制冷功能；
 

　　6.顯微鏡：數值孔徑(50倍物鏡為0.5、100倍物鏡為0.9)，視場數26.5；
 

　　7.真空進樣裝置(適用于自動化檢測法)：真空度50mbar；
 

　　8.注射泵(適用于自動化檢測法)：流速范圍包含2μL/min；
 

　　本標準的建立不僅彌補了我國益生菌行業質控方法的空白，同時對益生菌活菌計數及活性檢測的標準檢測方法進行了補充，很好的解決了益生菌行業長期缺乏產品標準規范，導致益生菌產品質量良莠不齊的問題。